TRPM8调控EMT促进人肾癌细胞A498迁移及侵袭的作用研究

目的：探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响人肾癌细胞的侵袭及迁移能力。方法利用荧光定量PCR来检测人肾癌细胞A498、786-0以及GRC-1中TRPM8的表达水平；设计并合成靶向TRPM8的特异性shRNA，通过脂质体转染法转染TRPM8表达最高的肾癌细胞A498以构建稳定低表达TRPM8细胞株，通过Western blot和定量PCR来验证shRNA的干扰效率；通过Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力，Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail和WNT-5a的变化。结果 TRPM8-shRNA转染后，能够有效抑制A498细胞中TRPM8的表达；Transwell法检测细胞侵袭能力结果显示，A498组、Control组和shRNA组的穿膜细胞数分别为(102.56±11.41)、(105.67±10.83)、(74.62±8.65)，A498/shRNA组细胞侵袭能力受到显著抑制(F=49.105，P<0.01)；Transwell法检测细胞迁移能力结果显示，A498组、Control组和shRNA组的穿膜细胞数分别为(115.45±10.31)、(109.33±7.53)、(76.21±13.28)，A498/shRNA组细胞迁移能力受到显著抑制（F=36.168，P<0.01）；Western blot法结果发现，TRPM8干扰组细胞的E-cadherin表达增加，N-cadherin的表达降低；此外，TRPM8干扰组细胞的Snail以及WNT-5a表达较对照组显著下降。结论运用RNA干扰技术能够有效沉默A498细胞的TRPM8基因，并诱导其迁移侵袭能力的下降，其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT，从而影响肾癌细胞的迁移及侵袭。以上提示TRPM8在肾癌的发生发展中起重要作用，抑制TRPM8的表达可能成为一种治疗肾癌的新方法。