人肺癌转移相关蛋白1重组慢病毒载体的构建和病毒包装及其鉴定

目的 构建人肺癌转移相关蛋白1(LCMR1)重组慢病毒载体,并包装慢病毒颗粒,为进一步研究该基因在人肺癌发生发展中的功能提供实验基础.方法 将人肺癌转移相关基因LCMR1扩增后,酶切连接构建人pLVX-IRES-Neo病毒载体,转化DH5a大肠杆菌,挑取阳性克隆测序鉴定,将重组质粒与慢病毒系统一起转染Lenti-X 293T病毒包装细胞,并将收集的病毒感染肺癌细胞系95C,即时定量聚合酶链反应(q-PCR)及蛋白质印迹法验证其表达情况.结果 DNA测序结果证实成功构建人LCMR1重组慢病毒载体,包装后的病毒浓缩液浓度可达2.5×108 IFU/ml以上.包装后的病毒颗粒感染95C细胞系,LCMR1的mRNA水平提高9.98倍(P＜0.05),蛋白水平的表达也明显增强.结论 本研究成功构建了pLVX-IRES-LCMR1-Neo慢病毒载体,获得的慢病毒颗粒有效感染肺癌细胞系95C,为研究该基因在肺癌中的功能建立了模型.