人泛素结合酶cDNA的分离与克隆

目的 分离、克隆人泛素结合酶基因 ,并初步研究其组织表达谱。方法 根据与鼠泛素结合酶有较高一致性的人表达序列标签 （EST）设计筛库引物 ,筛选人胎脑 c DNA文库 ,采用生物信息学方法分析筛选到的阳性克隆 ;设计探针 ,应用人多组织杂交膜分析该基因的组织表达谱。结果 从文库中筛选到两个互为剪接异构体的长度分别为 1471和 1315 bp的 c DNA克隆 ,其开放读码框分别编码 147和 10 9个氨基酸 ,与鼠、果蝇、线虫等生物的泛素结合酶均高度同源 ,含泛素结合结构域 ,Gen Bank登录号分别为 AF12 5 0 44和 AF12 5 0 45。Northern杂交显示 ,该基因在成人心脏、胎盘、胰腺等组织中呈特异表达 ,而在脑、肝、肺、肾和骨胳肌中基本不表达。结论 泛素结合酶基因在人体中的表达受到时间和空间的双重调控。