采用集合转化的方法构建HIV-1蛋白酶区和反转录酶区T-A克隆载体

DNA重组技术是将两个或多个单独的DNA片段连接起来产生一个能在特定宿主中自主复制的DNA分子。重组DNA分子最简单的构建方法是将基因片段克隆到质粒或噬菌体等克隆载体上。常用的质粒载体有pBR322、pUC和pGEM等。这些载体含有不同的多克隆位点，适于将含有不同酶切位点的DNA片段连接起来[1]。
　　获得性免疫缺陷综合征（acquired immune defi-ciency syndrome, AIDS）又称艾滋病，是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）引起的一种严重危害人类健康的致死性传染病。在HIV感染的所有阶段，都有持续高水平的HIV复制[2]。这种病毒的持续复制与耐药的发生和发展密切相关。HIV-1为单链RNA病毒，基因组全长约9.8 kb，中央编码区由3个结构基因gag、pol、env组成，其中pol基因片断覆盖 HIV 蛋白酶和反转录酶的编码区，目的片段长度为1865 bp[3，4]。我们采用集合转化方法对HIV-1反转录酶区进行T-A克隆，以得到重组质粒，为表型耐药下游实验摸索一套较为成熟的方法，报告如下。