利用CRISPR/Cas9系统快速建立APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型

目的 利用CRISPR/Cas9系统构建APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠模型,为开展AD的病因治疗提供载体.方法 采用CRISPR/Cas9系统,选择H11作为插入位点,将有活性的sgRNA、Cas9 RNA和含有目标同源重组序列的载体显微注射入C57BL/6品系野生雌性小鼠的受精卵中,鉴定得到的F0代阳性小鼠再与C57BL/6野生小鼠交配,从而获得F1代小鼠.对鉴定得到的F1代杂合子小鼠,选择来自同一只F0代小鼠基因型一致的F1代杂合子小鼠,达到性成熟后进行同胞交配,获得F2代小鼠.采用PCR方法 鉴定F2代小鼠的基因型结果 ,采用Western blot检测APP和PS1在F2代小鼠脑组织中的蛋白表达水平.结果 27只F2代小鼠经PCR鉴定基因型,5只F2代小鼠出现约344 bp和608 bp的目的基因条带,表明成功构建出转入APP和PS1基因的APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠.Western blot检测显示APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠的APP和PS1的表达水平均明显高于同窝野生型小鼠.结论 利用CRISPR/Cas9系统可成功构建APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠.