成年小鼠心脏单个细胞悬液的制备及流式细胞检测

目的:制备成年小鼠心脏单细胞悬液,测定心肌缺血再灌注损伤(reperfusion injury,RI)小鼠心肌中白细胞的分布情况.方法:选取10～12周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠15只,按照随机方法将其分为假手术组5只(模型制备成功5只)和RI 24 h组10只(模型制备成功7只).RI 24 h组小鼠心脏缺血30 min后,于再灌注24 h后摘取小鼠心脏,配置心脏消化液,冲洗剪碎进行消化,经过滤离心收集心脏细胞,行流式细胞检测,以CD45标记白细胞,并进一步行CD11c标记树突状细胞及Ly6C标记单核细胞.比较两组CD45阳性细胞比例及CD11c、Ly6C标记的细胞占CD45阳性细胞比例;比较两组各细胞在总心肌细胞中的比例.结果:每只小鼠心脏制备所得的单个细胞悬液行细胞计数为(1～2)×106个.RI 24 h组CD45阳性细胞占心肌细胞比例高于假手术组(P<0.05);RI 24 h组CD11c+Ly6C+树突状细胞占CD45阳性细胞的比例高于假手术组(P<0.05).RI 24 h组CD11c标记的树突状细胞及Ly6C标记的单核细胞等各亚群细胞在总心肌细胞中的比例均高于假手术组(P<0.05).结论:成年小鼠心脏细胞的单细胞悬液可以通过切碎和消化制备,可用单细胞悬液流式细胞仪检测RI心肌白细胞、树突状细胞和单核细胞的显著变化.本研究为小鼠心脏白细胞的详细分析提供了一种可行的方法.