蝎毒多肽干预CML K562细胞Hedgehog通路上游活化因子的分子机制研究

目的 观察蝎毒多肽提取物(PESV)对K562细胞Hedgehog通路上游活化因子的影响并探讨分子调节机制.方法 体外培养K562细胞,接种于24孔培养板,治疗组分别加入低、中及高浓度(10、20及40 mg/L)PESV 20μL,阳性对照加入2 g/L的甲磺酸伊马替尼(GLEEVEC)20 μL(GLEEVEC组),阴性对照组加入生理盐水20 μL,共培养48 h,应用Real-time PCR及Western blot法检测K562细胞BCR/ABL基因mRNA及融合蛋白P210bcr/abl表达的变化,并检测Hedgehog通路上游活化因子Shh、Smo、PtchmRNA及蛋白的表达.结果 与阴性对照组比较,PESV各剂量组对K562细胞BCR/ABL融合基因mRNA及P210bcr/abl蛋白的表达均有不同程度的抑制作用(P＜0.05);与阴性对照组比较,中、高剂量组Shh、Sm、Ptch基因mRNA及蛋白在K562细胞中的表达水平均降低(P＜0.05);与GLEEVEC组比较,中、高剂量组Shh、Smo、Ptch基因相对表达水平差异均无统计学意义,但低剂量组均升高(P＜0.05).结论 PESV可以抑制K562细胞BCR/ABL融合基因及P210bcr/abl蛋白的表达,并通过抑制Hedgehog通路上游活化因子的表达阻断该通路的激活,进而抑制慢性粒细胞白血病的进展.