CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建

Zhuo-lin LU,Xian-jia XIONG,Yun-dan WU,Hui ZHOU,Jun JIA,Shuang-lin WANG,Li-li WU,Yi-jie LIU,Yang QIAO,Bing YANG,Xiu-juan ZHAO,Qing-song WANG,Chun-yong HAN,Ling ZHANG,Yan SUN

Tianjin Medical Journal（2017）

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摘要

目的利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系.方法构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA(sgRNA)表达载体pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA,将两个载体共转染Hut78细胞,通过qPCR检测EZH2 mRNA的表达情况,通过Western Blot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况.结果测序结果显示,构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA表达载体插入序列完全正确.将构建的两个质粒共转染Hut78细胞,qPCR结果显示EZH2基因在RNA水平上表达显著上调;Western blot结果显示EZH2和H3K27me3蛋白表达水平显著提高.结论通过CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系.

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