肉叶芸香碱对黑色素瘤A375细胞上皮间充质转化的影响

目的 探讨肉叶芸香碱对黑色素瘤A375细胞的抑制作用及影响机制.方法 (1)体外培养的黑色素瘤A375细胞,分别给予0(对照)、0.5、1、2、5、10、20、50和100 mg/L浓度的肉叶芸香碱处理48 h,CCK-8法检测各浓度组细胞存活率,确定实验浓度.(2)细胞经0、1、2 mg/L肉叶芸香碱处理后,分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin),Snail和p53的表达水平.(3)细胞设对照组(仅转染空载体)、空载体组(经2 mg/L肉叶芸香碱处理24h后,转染空载体)、Snail转染组(经2 mg/L肉叶芸香碱处理24 h后,转染Snail cDNA),转染后检测各组细胞迁移和侵袭能力.结果 (1)肉叶芸香碱浓度≥2 mg/L时,随着处理浓度的升高,A375细胞存活率较对照组明显降低(P＜0.05),后续实验选取0、1、2 mg/L肉叶芸香碱进行处理.(2)随着肉叶芸香碱处理浓度的升高,各组划痕区细胞数和穿膜细胞数均明显下降,细胞的迁移和侵袭能力逐渐减弱;同时EMT相关蛋白E-cadherin、p53表达升高,N-cadherin、Snail表达降低.(3)细胞转染实验结果显示,转染Snail后,细胞的迁移和侵袭能力较空载体组有所提高.结论 肉叶芸香碱可抑制A375细胞的增殖,降低其转移和侵袭能力.这可能是通过激活p53后降低Snail表达,进而升高E-cadherin,下调N-cadherin来抑制EMT过程而实现的.