脂联素对骨肉瘤MG-63细胞增殖和AMPK磷酸化的影响

目的 研究脂联素对MG-63细胞单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)磷酸化和细胞增殖的影响.方法 将骨肉瘤细胞株MG-63接种于6 cm板上,接种密度l×105/ml,待细胞生长至约80％时,每板加入5 ml含脂联素的培养基(浓度1μg/ml),作用时间分别为0、15、30、60、120 min;Western Blot检测AMPK蛋白磷酸化水平,选择最佳的脂联素处理时间.分别设对照组和脂联素组(0、0.001、0.01、0.1、1μg/ml),根据脂联素最佳处理时间处理后,Western Blot检测AMPK磷酸化水平,确定脂联素最佳作用浓度.依据最佳作用时间及最佳浓度,将PBS作为对照,相应浓度脂联素作处理组,Western Blot检测AMPK磷酸化水平,明确脂联素对骨肉瘤MG-63细胞AMPK磷酸化的影响.CCK-8法检测脂联素对MG-63细胞增殖的影响,将MG-63细胞接种于96孔板,每孔细胞数为5000个,培养过夜.实验分为空白对照组和5个质量浓度梯度(0.001、0.01、0.1、1、10 μg/ml)脂联素重组体组,每组做5个平行孔,作用时间24 h,培养结束前4h,每孔加入10μl的CCK-8试剂,继续培养2.5h.490 nm测定光密度值(OD490).结果 脂联素浓度≥0.01 μg/ml时,MG-63细胞AMPK磷酸化水平显著升高(t=5.894,P=0.007);短时间内脂联素对MG-63细胞增殖无明显抑制作用(F=6.335,P=0.072).结论 脂联素可以增强AMPK的磷酸化,短时间刺激脂联素对MG-63细胞增殖无明显抑制作用.