顺铂诱导自噬和MAPK信号调控前列腺癌细胞耐药的机制研究

目的:探讨自噬和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号在前列腺癌细胞顺铂(CDDP)化疗后耐药性获得过程中所发挥的功能.方法:通过细胞克隆分析实验检测不同CDDP浓度下的细胞存活情况以确定最佳处理浓度及耐药细胞株,Western blotting检测自噬和MAPK信号相关蛋白表达含量变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测自噬相关基因转录水平变化,AnnexinV-FITC及Z-VAD-FMK检测细胞凋亡情况,利用药物抑制自噬和MAPK信号通路探讨两者对前列腺癌细胞耐药性获得的贡献.结果:细胞克隆分析实验结果显示,7.5 μg·ml-1CDDP诱导显著的细胞凋亡,通过连续10d的药物筛选获得耐药细胞株,显微镜下观察到前列腺癌细胞获得耐药性后细胞形态发生变化,同时DNA损伤修复的关键因子PARP蛋白表达上调;RT-PCR及Western blotting结果显示CDDP激活了前列腺癌细胞中的自噬过程,ATG5和LC3B-Ⅱ蛋白及mRNA表达水平均上调(P＜0.05);AnnexinV-FITC及Z-VAD-FMK实验结果显示抑制了自噬后细胞凋亡显著增加(P＜0.05),前列腺癌细胞恢复了对CDDP的敏感性,且此过程有MAPK信号的参与.结论:自噬和MAPK信号在前列腺癌细胞CDDP耐药过程中发挥重要作用,这一结果可对改善前列腺癌患者的治疗策略提供新思路.