1例HCV不同基因型/亚型混合感染的确认

目的:鉴定1例NS5B区和E1区PCR产物测序结果分型不一致的HCV病毒株为基因重组还是混合感染.方法:提取血浆的病毒总RNA,逆转录后进行巢式PCR扩增,以NS5B和E1编码区为目的基因进行PCR扩增并测序,通过构建进化树进行基因分型,发现两个编码区基因分型的结果不同,对NS5B和E1区进行克隆测序,每个编码区分别挑取50个克隆进行测序和基因分型;针对HCV全长序列分别设计7对型特异性引物并进行PCR扩增.结果:NS5B(8 256 ～8 641 bp)区PCR产物测序后的分型结果为1b,E1 (697 ～1 322 bp)区为2a;NS5B(8 266 ～9 274 bp)基因的50个克隆测序结果均为1b,C/E1 (849 ～2 152 bp)基因的50个克隆测序结果均为2a;7个片段的PCR型特异性扩增以及进化分析发现,在同一区域既存在1b亚型,也存在2a亚型.结论:该病例为1b和2a的混合感染.