NLRP3基因真核表达载体的构建和定位

目的:构建人NLRP3真核表达载体,并证实融合蛋白在人心肌细胞中定位.方法:以人胎脑cDNA文库为模版,PCR扩增NLRP3全长编码基因,亚克隆至p3×FLAG-cmvTM-10表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到人心肌细胞中,提取细胞蛋白进行Western blotting检测.利用激光共聚焦扫描显微镜观察FLAG-NLRP3在HCM细胞内定位.结果:NLRP3全长基因序列克隆到了真核表达载体p3×FLAG-cmvTM-10中,酶切鉴定片段大小3 111 bp.Western blotting检测到了融合蛋白FLAG-NLRP3表达,分子量约为114 kD.FLAG-NLRP3在人心肌细胞中表达,定位于细胞浆内.结论:成功构建了FLAG-NLRP3全长基因真核表达载体,FLAG-NLRP3蛋白主要定位于心肌细胞浆内.