流式细胞术双标记法细胞凋亡检测方法的探讨

目的:研究流式细胞术磷脂结合蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染方法来检测细胞凋亡合理实验流程及样品制备方法.方法:正常培养A549细胞随机分为H2O2诱导细胞凋亡的实验组和正常培养的对照组.实验组与对照组均分别采用,弃培养基和留培养基的方式制备单细胞悬液.然后样本中先后加入AnnexinⅤ和PI,最后加入工作液流式细胞仪检测.结果:A549细胞经H2O2诱导细胞凋亡率明显增加,采用保留培养基的方式收集制备样本的凋亡率明显高于弃置培养基的凋亡率.结论:凋亡样品制备过程中,必须收集凋亡细胞培养基上清,并与胰酶消化所得样品细胞悬液混合离心制备单细胞悬液,以避免凋亡细胞丢失造成实验结果的失真.