细胞衰老过程中POLD1基因表达下调的甲基化调控机制

目的 探讨人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)衰老过程中POLD1基因表达下降的甲基化调控机制.方法 按传代情况将2BS分为年轻细胞组(25PD)、衰老细胞组(55PD).采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测2BS衰老过程中POLD1 mRNA和蛋白表达水平的变化,利用亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)分析2BS衰老过程中POLD1基因启动子区甲基化状态的变化,应用甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dc)处理2BS(48PD),RT-PCR检测处理前后POLD1 mRNA表达变化,分析2BS衰老过程中POLD1基因甲基化及去甲基化对POLD1 mRNA表达的影响及二者之间的关系.结果 与年轻细胞组比较,衰老细胞组POLD1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),POLD1启动子区甲基化水平显著增高(P<0.01),且POLD1 mRNA表达水平与其启动子区甲基化水平呈负相关(n=6,r2=0.853,P=0.009);经5-Aza-dc处理后,POLD1 mRNA表达水平增高(P<0.01).结论 POLD1启动子区甲基化水平的改变与其增龄性表达下调存在密切关系.