地塞米松对体外培养足细胞nephrin磷酸化的影响

目的 nephrin磷酸化在维持正常足细胞结构和功能上起重要作用.糖皮质激素是治疗原发性肾小球疾病蛋白尿的最常见药物.本研究观察地塞米松(dexamethasone,Dex)对体外培养足细胞nephrin磷酸化的影响.方法 体外培养的足细胞给予不同浓度Dex(0、1、10、100nmol/L)处理24h,100nmol/L Dex处理足细胞不同时间(0、12、24、36h),Dex (100nmol/L)与足细胞一起培养,分别加入糖皮质激素受体拮抗剂及盐皮质激素受体拮抗剂,小干扰RNA(siRNA)沉默Nck或Fyn的表达,采用抗pY1228 nephrin抗体应用免疫印迹分别测定nephrin磷酸化水平的表达变化.结果 10、100nmol/L Dex处理足细胞明显增加nephrin的磷酸化,100nmol/L Dex与足细胞孵育24、36h明显增加nephrin的磷酸化,100nmol/L Dex与足细胞孵育24h导致nephrin磷酸化明显增加,这种增加可被糖皮质激素受体拮抗剂所抑制,但不被盐皮质激素受体拮抗剂所抑制.100nmol/L Dex与足细胞孵育24h导致nephrin磷酸化明显增加,加siRNA沉默Nck或Fyn,前者可部分抑制nephrin磷酸化增加,后者完全抑制nephrin磷酸化.结论 糖皮质激素可增加nephrin的磷酸化,糖皮质激素治疗人类肾小球疾病可能通过调节Nck和Fyn复合物促进nephrin磷酸化实现,这种作用可能阐明了糖皮质激素治疗肾病新的机制.