潜在抑癌基因eIF4E3野生型和突变体质粒的构建

目的 构建并鉴定野生型PIRES2-EGFP-eIF4E3(eIF4E3)、突变体PIRES2-EGFP-eIF4E3 C69a(eIF4E3C69a)、突变体PIRES2-EGFP-eIF4E3 w86a(eIF4E3 w86a)真核过表达载体,为进一步研究基因eIF4E3的功能奠定基础.方法 通过PCR在人细胞cDNA库中扩增eIF4E3,人工化学合成突变体eIF4E3C69a和eIF4E3w86a.将目的 片段和空载质粒PIRES2-EGFP分别双酶切后进行连接,重组质粒转化感受态大肠杆菌DH5α,挑取单克隆,摇菌扩增,提取质粒,双酶切电泳、菌液及其质粒进行PCR鉴定、DNA测序鉴定.结果 PCR结果 显示插入片段大小正确,测序结果 通过Blast比对NIH基因库的eIF4E3基因序列显示eIF4E3、eIF4E3C69a、eIF4E3w86a序列准确且编码框架正确插入PIRES2-EGFP中.结论 成功构建eIF4E3、eIF4E3C69a、eIF4E3W86a真核过表达载体.