抗CD71单抗与蓖麻毒蛋白A链免疫毒素的制备及其体外抗肝癌细胞效应的研究

目的 因抗CD71单抗具有靶向定位特性,及利用蓖麻毒蛋白A链(RTA)的细胞毒性,将两者进行偶联,构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,并研究其体外抗肝癌细胞效应.方法 从蓖麻籽中提纯RTA,以N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)-propionate,SPDP]作为偶联剂,偶联抗CD71单抗,构建免疫毒素(IT),以SDS-PAGE检测IT,以间接ELISA方法测定IT的免疫反应性,以WST-1法测定IT的体外抗肝癌细胞效应.结果 蓖麻籽经过研磨、过滤、亲和层析、凝胶层析、离子交换层析等步骤成功提纯RTA.提纯的RTA与CD71 mab进行偶联,成功构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,SDS-PAGE结果显示,在非还原状态下,为一条分子量＞ 116kD的单一电泳条带,在还原状态下,为三条电泳条带,分别位于约55kD处、约32kD处及约28kD处.间接ELISA结果显示,免疫毒素与单抗的曲线走势一致,但各浓度下OD值均较单抗组略低.WST-1结果显示,IT在各浓度梯度下均表现出对HepG2细胞和LO2细胞不同的杀伤作用(P＜0.05).结论 CD71 mab-RTA基本保留了免疫反应性,及表现出对HepG2细胞和LO2细胞的不同体外细胞毒效应,提示对肝癌细胞具有较好的靶向细胞毒作用,有望成为新型的抗肝癌药物.