血液总DNA提取方法的优化

目的:比较不同蛋白酶K浓度对血液总DNA浓度和纯度提取的影响作用.方法:随机抽取22份新疆建设兵团第三师51团全民体检血液样本,以TIANGEN生化科技(北京)有限公司血液提取试剂盒(离心柱型)为基础,分析11种不同蛋白酶K浓度(18.0,18.4,18.6,18.8,18.9,19.0,19.1,19.2,19.4,19.6,20.0mg/mL)对250μL血液总DNA浓度和纯度提取的影响.结果:(1)在蛋白酶K浓度在18.0～20.0mg/mL范围时,随着蛋白酶K浓度的增加,所提取的DNA浓度在19.0mg/mL时达到最大,当继续增加蛋白酶K浓度时,DNA浓度呈明显下降趋势;(2)随着蛋白酶K浓度的增加,OD260/OD280在18.6mg/mL时达到最大,且继续增加蛋白酶K浓度,OD260/OD280呈缓慢下降趋势;(3)蛋白酶K浓度在18.8～19.0mg/mL时,所提取的DNA浓度和纯度最佳.结论:建议TIANGEN生化科技(北京)有限公司在提取250μL人血液样本时选择蛋白酶K浓度应为18.8～19.0mg/mL,既能提高血液核酸DNA的提取质量,又可降低提取人血液DNA的成本.