结核分枝杆菌Rv1626的原核表达及其免疫功能研究

目的 拟靶向结核分枝杆菌(M.tb)感染后的分泌期抗原Rv1626,构建其原核表达质粒pPROEX-Rv1626并表达纯化,通过人群和动物实验评价其免疫原性.方法 构建重组载体pPROEX-Rv1626,以全血干扰素释放分析技术(WBIA)检测其是否能被山西省长治市M.tb感染者的T细胞特异性识别;同时免疫小鼠,检测其特异性诱导脾细胞分泌的IFN-γ、TNF-α和IL-2水平及抗体水平.结果 ①成功构建重组载体pPROEX-Rv1626,并成功诱导表达、纯化和鉴定;②rRv1626蛋白诱导M.tb感染者外周血中淋巴细胞产生的IFN-γ水平均显著高于健康者对照者(<0.001),ATB患者外周血中淋巴细胞分泌IFN-γ水平显著高于LTBI人群(<0.001);③BCG+Rv1626/DMT组产生的特异性相关抗体滴度显著高于Rv1626/DMT组及BCG组(<0.01);Rv1626/DMT组和BCG+Rv1626/DMT组的IgG2a/IgG1比值显著高于DMT组和BCG组(=33.69),且前两组IgG2a/IgG1>1,倾向于Th1型细胞免疫应答;④不同免疫组小鼠无论是PPD或rRv1626蛋白刺激,BCG+Rv1626/DMT组均分泌最高水平的IL-2、IFN-γ和TNF-α,其次为BCG组、Rv1626/DMT组,PBS组为最低.同时Rv1626/DMT组显著高于DMT组(<0.01).结论 rRv1626能被M.tb感染者T细胞所识别,免疫小鼠能诱导抗原特异性Th1型细胞免疫应答,可能与其提供的免疫保护力密切相关.