rAAV-NGF-GFP载体的构建及鉴定

目的:构建携带神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的重组腺相关病毒载体(recombinant deno-associated virus,rAAV),为临床利用神经生长因子治疗阿尔兹海默病(Alzheimer'sdisease,AD)提供实验依据.方法:采用基因重组技术构建含有NGF基因的AAV-NGF载体,将pAAV-NGF-GFP、pRC、pHelper 3种质粒共转染HEK293细胞,包装获取重组腺相关病毒,采用SDS-PAGE胶和Dot-blot检测病毒纯度和滴度;重组腺相关病毒转染人类神经母细胞瘤细胞(SK),荧光显微镜下观察GFP表达.结果:成功构建rAAV-NGF-GFP载体,滴度为1.7×1010v.g/ml,将病毒转染SK细胞48 h后细胞中有荧光表达.结论:构建的rAAV-NGF-GFP病毒载体可成功转染SK细胞.