利用免疫共沉淀联合质谱技术筛选盐藻MAPK的互作蛋白
Journal of Nuclear Agricultural Sciences（2020）
摘要
为进一步探究杜氏盐藻促有丝分裂原活化蛋白激酶(DsMAPK)的功能,采用免疫共沉淀联合质谱技术筛选盐藻MAPK的互作蛋白.将pGS21a-MAPK质粒转入大肠杆菌BL21中表达MAPK蛋白并制备多克隆抗体;将培养至对数生长期的盐藻细胞进行盐胁迫处理,然后提取盐藻总蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting检测;以内源性靶蛋白为诱饵,将细胞总蛋白与MAPK抗体进行共孵育,将经蛋白A/G琼脂糖珠纯化的免疫共沉淀复合物进行质谱检测.结果 表明,制备的多克隆抗体特异性良好;筛选出165种特有的差异蛋白.通过GO和KEGG分析发现,这些差异蛋白主要参与了新陈代谢、遗传信息的传递以及信号转导等生物学调控过程.蛋白质互作网络分析发现,直接与MAPK相互作用的蛋白有4种.本研究结果为深入研究杜氏盐藻响应盐胁迫的分子机制提供了参考.
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