抗烟草丛顶病转基因烟草的培育

烟草丛顶病由烟草丛顶病毒、烟草脉扭病毒、烟草脉扭病毒伴随RNA和烟草丛顶病卫星RNA复合侵染引起的毁灭性病害,为了构建这四种病毒的干扰载体,培育抗病毒烟苗,本研究首先利用PCR扩增、酶切、克隆、连接转化和胶纯化技术分别得到携带酶切序列约200 bp的四种病毒目的片段;其次,用目的片段与携带有对应酶切序列的pENTRTM2B入门载体连接、检测和纯化得到携带有目的片段的入门重组载体pENTRTM 2B-Virus;最后,用入门重组载体与表达载体PK7GW1GW2进行LR反应,经PCR检测得到正确干扰重组载体后,再用叶盘法将目的基因转入烟草叶片中,进一步用组培技术培育组培苗.本研究为解决目前烟草丛顶病防治难题,提供烟草生产发展技术思路和理论依据.