通过优化gRNA设计提高CRISPR/Cas9系统中基因编辑效率的方法
Molecular Plant Breeding（2019）
摘要
CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于动物、植物、真菌、细菌的新一代基因定点编辑技术,如何提高gRNA的编辑效率是该技术的关键点也是许多研究者关注的焦点.本研究利用CRISPR/Cas9技术对番茄miR 167a前体序列进行基因编辑,根据番茄miR 167a前体序列在线设计候选gRNA,同时结合体外编辑检测的方法筛选出能够在体外成功编辑的gRNA-G1,把其连接到含有荧光标记的pP1C.1C表达载体,转化番茄子叶,产生愈伤组织数116个,得到5个含有表达载体的材料,经测序发现,其中3个材料发生了编辑.结果 表明,通过体外检测和在线软件设计相结合的方法来快速检测gRNA的编辑效率,能筛选出最优的gRNA用于载体的构建,与未采用体外编辑检测来设计gRNA的方法相比,显著提高了CRISPR/Cas9的编辑效率.本研究通过优化gRNA,创新了一种高效利用CRISPR/Cas9进行基因编辑的方法.
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