苦瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化
Molecular Plant Breeding（2018）
摘要
为建立适合于苦瓜的ISSR反应体系,为后续苦瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以“609”苦瓜品种作为模板DNA,试验采用单因素试验设计对影响反应体系的DNA模板、引物、dNTP和Taq酶的含量进行优化,并对单因素结果进行L9(33)正交试验设计.研究结果表明,苦瓜ISSR:20 μL最佳反应体系为:2μL的10×Buffer(含Mg2+),30ng模板DNA,0.25 mmol/L的dNTP,0.5 μmol/L的引物,1.25 U的TaqDNA聚合酶.在此基础上,对优化引物的退火温度,确定最适宜的退火温度.验证优化的最佳反应体系,选用引物cw39132对48个苦瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强和重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于苦瓜的ISSR分子标记.
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