农杆菌介导的GbWOX9基因对海岛棉胚性细胞的遗传转化
Molecular Plant Breeding（2018）
摘要
为探究WOX9基因在棉花体细胞胚胎发育过程中的功能,借助农杆菌介导化学试剂诱导型植物表达载体pTA7002/Gb WOX9和pTA7002/Gb WOX9 anti对海岛棉‘新海16’胚性细胞进行遗传转化,以此利用化学诱导剂在胚性细胞中诱导Gb WOX9的过量或抑制表达.研究结果表明在菌液OD600≈ 0.5～0.6时进行15 min的农杆菌侵染并共培养24 h之后,将侵染的细胞在500 mg/L头孢和20 mg/L潮霉素的抗性培养基上筛选继代两次,最终获得若干抗性阳性胚性细胞.进一步将抗性阳性细胞在化学诱导剂30 μmol/L地塞米松处理5h后,通过qRT-PCR技术对其进行Gb WOX9的基因表达鉴定,结果表明与对照组相比,正、反义转基因抗性阳性细胞中的Gb WOX9基因表达量皆有显著差异.该研究初步建立了以潮霉素为筛选标记的海岛棉遗传转化体系,并在此基础上将GbWOX9正义和反义链成功导入‘新海16’胚性细胞中,为其功能的鉴定提供了参考.
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