利用番茄果实特异启动子E8改造‘外源基因清除’的表达载体及转化金柑研究

利用"外源基因清除"技术(‘Gene-Deletor’),将外源基因从转基因金柑果实中彻底清除,可以达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的.本研究利用引物pE8F和pE8R从樱桃番茄中克隆果实特异启动子E8,通过Sal Ⅰ和Sma Ⅰ双酶切置换掉"外源基因清除"载体(pCambia-LF-polseed-FLP,简称Y-A)中的花粉、种子特异启动子PAB5,重新构造"外源基因清除"载体Y-A-E8,利用农杆菌EHA 105介导转化实生态金柑,获得转化植株,并通过npt Ⅱ基因特异引物npt Ⅱ-F和npt Ⅱ-R PCR检测阳性转化植株.载体Y-A-E8 SalⅠ和SmaⅠ双酶切结果表明,E8启动子成功替换启动子PAB5,Y-A-E8经EHA105介导转化成功获得11株转化植株且PCR检测到6株为Y-A-E8转基因植株.研究结果可为"外源基因清除"技术在转基因金柑方面的应用提供参考.