黄毛草莓编码NB-ARC结构域的FnCN基因和启动子克隆及FnCN基因表达分析

利用同源克隆技术得到黄毛草莓(Fragaria nilgerrensis Schlecht.ex Gay)中编码NB-ARC结构域的抗病相关基因FnCN及启动子序列.序列分析结果表明:FnCN基因开放阅读框的长度为933 bp(GenBank登录号MN240290),编码310个氨基酸残基,其N端有1个Rx-CC结构域,C端有1个保守的NB-ARC结构域.该基因起始密码子上游启动子pFnCN序列的长度为910 bp(GenBank登录号MN240291),包含TATA-box、CAAT-box、激素响应元件、干旱诱导MYB结合位点、光响应元件和厌氧诱导顺式作用元件等.氨基酸序列的同源性比对结果表明:黄毛草莓FnCN基因与野草莓(Fragaria vesca Linn.)CN基因编码氨基酸序列的相似性最高(95.16％).成功构建了黄毛草莓FnCN基因的植物过表达载体pCAMBIA1301-HA-FnCN和病毒诱导基因沉默载体pTRV2-FnCN.实时荧光定量PCR检测结果表明:黄毛草莓叶片接种胶孢炭疽菌〔Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.〕后0～3 h FnCN基因表达下调,之后逐渐上调;接种后48 h该基因的相对表达量最高,是接种后0 h的3.3倍.研究结果显示:黄毛草莓FnCN基因响应胶孢炭疽菌的胁迫,推测其在黄毛草莓抗炭疽病过程中发挥着重要作用.