抗对硫磷单链抗体在昆虫细胞中的表达及活性鉴定

利用 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，在 Sf9昆虫细胞中表达抗对硫磷单链抗体，并评价该重组抗体 scFv-4C6的分子识别活性。以分泌能特异性识别对硫磷的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6为 RNA来源，采用 RT-PCR方法扩增抗体的重链和轻链可变区基因，经重叠延伸PCR方法串联拼接获得单链抗体基因片段(scFv-4C6)。构建包含目的片段的重组杆粒 Bacmid-scFv-4C6，转染 Sf9细胞表达目的蛋白，采用免疫印迹法(Western blotting)检测表达产物，间接竞争酶联免疫吸附(ic-ELISA)法评价产物的生物活性。结果表明：scFv-4C6基因片段拼装正确，成功转染 Sf9细胞，并在转染后72 h表达量最高，表达的单链抗体大小为28.3 kD；表达产物能特异性识别对硫磷，IC50值为7.9 ng/mL，对甲基对硫磷和杀螟硫磷分别有12%和1.8%的交叉反应率，与亲本单克隆抗体的识别性能相似。该研究表明，具有生物活性的抗对硫磷单链抗体 scFv-4C6可在昆虫细胞中成功得到表达。