齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备
Acta Phytopathologica Sinica（2019）
Abstract
采用RT-PCR法从感染齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)贵州分离物的苋色藜叶片中扩增出病毒的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列.测序结果显示,该保守片段长516bp,编码171个氨基酸残基.构建了该片段的原核表达载体pET32a-ORSV RdRp并转化BL21 (DE3)菌株,在25℃以0.4mmol·L-1IPTG诱导表达重组蛋白.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为36 kDa,与预测相符合.将该重组蛋白作为抗原免疫BABL/C小鼠,制备的多克隆抗体效价达1∶102400.间接ELISA结果表明,该多抗具有较强的特异性,能检测到ORSV感染的病叶汁液中的RdRp,而与其它感染4种同属或不同属病毒的病叶汁液不发生血清学交叉反应,本实验为进一步研究RdRp的结构和功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定基础.
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