转GbVe1基因在棉花基因组中的整合与定位分析

[目的]明确转GbVe1基因棉花的插入位点序列特征.[方法]Southern杂交筛选低拷贝基因插入的转基因棉花株系,以hiTAIL-PCR(Polymerase chain reaction)获取其T-DNA侧翼序列,然后根据获得的T-DNA侧翼序列设计特异PCR引物,验证插入位点的准确性.[结果]Southern杂交候选了T-DNA低拷贝插入的3个转基因棉花株系,hiTAIL-PCR分离到RB端侧翼序列(119～1 018bp)、LB端侧翼序列(243～516 bp);侧翼序列的AT碱基含量在63％以上.转基因株系7/100826-152和12/100826-393插入位点都位于Gohir.D01G157600.1内含子上.转基因株系1/w-ch14插入位点分别位于Gohir.D01G157600.1内含子和A12染色体的基因间隔区中.T-DNA在Gohir.D01G 157600.1内含子的插入事件造成了21 bp碱基的基因组序列缺失.T-DNA到侧翼序列的PCR产物证明Gohir.D01G 157600.1上的插入位点真实可靠.[结论]hiTAIL-PCR获取了转GbVe1基因棉花的T-DNA侧翼序列,提供了T-DNA插入位点位于Gohir.D01G 157600.1基因内含子的特异性检测引物.