尼古丁诱导人肠道上皮细胞自噬水平的研究

[目的]探讨尼古丁对人肠道上皮细胞自噬水平的影响和可能的分子机制.[方法]正常培养人肠道上皮细胞,采用不同浓度(0、2.5、5、10μM)尼古丁处理细胞24h.倒置显微镜观察细胞形态变化;通过CCK8法检测肠道上皮细胞的增殖情况;通过Western blot检测自噬标志物LC3、beclin1和p62变化;通过透射电子显微镜(TEM)检测自噬小体形成情况;通过GFP-LC3转染后激光共聚焦显微镜检测自噬斑点形成情况.同时,也检测了内质网应和mTOR/AMPK/Akt信号通路变化.[结果]细胞增殖随着尼古丁浓度的增加受到明显抑制,2.5μM尼古丁对细胞形态和增殖无显著影响.尼古丁能够上调LC3B-II和beclin1蛋白表达水平,同时下调P62的表达,且成浓度依赖性.TEM和激光共聚焦显示尼古丁作用后,肠道上皮细胞自噬体数量显著增加.[结论]低浓度的尼古丁能够诱导肠道上皮细胞的自噬,且对细胞增殖无影响,机制与内质网应激和mTOR/Akt信号通路激活相关.