软枣猕猴桃休眠芽超低温保存技术研究

[目的]探讨软枣猕猴桃种质资源的长期保存技术体系.[方法]以软枣猕猴桃'魁绿'休眠芽为试材,研究了预培养液种类、预培养时间、装载时间、玻璃化保护液、恢复培养基等因素对玻璃化法超低温保存后休眠芽成活率的影响.[结果]休眠芽在0.3 mol· L-1蔗糖+1 mol·L-1甘油的预培养液中震荡培养2d,常温下用装载液(2 mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖+MS)处理20 min,0℃条件下用PVS2(30％甘油+15％乙二醇+15％二甲基亚砜+ 0.4 mol·L-1蔗糖+MS)脱水120 min,换新鲜PVS2后迅速投入液氮中冻存24 h以上.取出后立即用38℃水浴解冻2min,用含1.2 mol·L-1蔗糖的MS卸载液洗涤30 min,无菌滤纸吸干后接种到MS+2mg·L-16-BA+ 0.02 mg·L-1NAA恢复培养基上,休眠芽成活率达86.30％.用流式细胞仪鉴定再生植株倍性,没有发现明显变化.[结论]建立了高效的软枣猕猴桃'魁绿'休眠芽玻璃化超低温保存体系.