柱花草炭疽菌致病力丧失突变菌株1869的T-DNA 插入位点侧翼序列的克隆

通过对实验室已构建的柱花草炭疽菌 T-DNA 突变体库中各转化子致病力的测定，获得致病力丧失突变菌株1869。对其进行 PCR 检测以验证 T-DNA 在1869基因组中插入情况，并测定观察其菌落直径、菌落形态及产孢量等生物学特性，利用 TAIL-PCR 克隆标记基因侧翼序列，采用生物信息学方法比对基因信息。结果表明，与柱花草炭疽菌野生型菌株 CH008相比，突变菌株1869表现致病力丧失，菌落生长速率也显著低于野生型；然而，在分生孢子形态、产孢能力、孢子萌发率等方面与野生型并无明显差异。TAIL-PCR 扩增得到 T-DNA 插入位点 RB 端序列467 bp，LB 端侧翼序列388 bp，经两侧序列拼接比对，所得序列与 Pac1同源性达到92％～96％，推测可能由于基因表达产物调节菌株对 pH 值的敏感性，从而影响了其致病过程。