研究肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化方法建立

糖基化修饰是生命体中最重要的一种蛋白质翻译后修饰之一,对生命体起着非常重要的作用.糖蛋白上的糖基可以作为凝集素的结合位点,因此凝集素可以用来鉴别和分析糖链结构,作为糖基化分析方法如质谱法的重要补充.本试验旨在建立和优化研究猪肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化方法,并应用该方法研究猪不同肠段糖基化修饰的差异以及断奶对仔猪肠道糖基化修饰的影响.结果表明:①荧光凝集素免疫组化方法最适条件为:切片脱蜡后,封闭切片30 min,采用5μg/mL FITC标记植物凝集素(FITC-Lectin)室温孵育1 h,以含有DAPI的封片剂进行封片.该方法具有灵敏度高、特异性好以及定量更为多元化的特点.②生长猪回肠和结肠中糖基化修饰模式不同,回肠主要以岩藻糖、N-乙酰葡萄糖胺为主,而结肠中主要以N-乙酰葡萄糖胺、岩藻糖和甘露糖为主.除甘露糖分布在非杯状细胞的肠上皮细胞和固有层外,岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺主要分布在肠绒毛表面和杯状细胞中.③22～28日龄仔猪回肠中N-乙酰葡萄糖胺的含量随着仔猪日龄的增加而增加(P<0.05),断奶显著降低了28日龄仔猪回肠中N-乙酰葡萄糖胺的含量(P<0.05).综上所述,本研究成功建立猪肠道糖基化修饰的研究方法,并通过此方法发现仔猪回肠中N-乙酰葡萄糖胺可作为肠道屏障功能完善的标志之一.