猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州株GZ-RNSP2基因的克隆与遗传变异分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)贵州株GZ-R的遗传变异情况及其NSP2基因的特征,本试验基于NSP2基因设计了2对特异性引物对目的基因进行巢式RT-PCR、克隆和序列分析.结果 显示,第二轮巢式PCR除扩增出约3 000 bp的预期条带外,还扩增出另一条约1 200 bp的条带;将两DNA片段克隆至pMD19-T载体后经测序得到两条片段,大片段长2 980 bp,命名为GZR-NSP2 L;小片段长1 131 bp,命名为,GZR-NSP2 S;两片段同源性比对发现,GZR-NSP2-S具有GZR-NSP2 LN端第1-945位核苷酸与C端第2 795-2 980位核苷酸,缺失GZR-NSP2-L第946-2 794位之间的核苷酸;GZR-NSP2-L与VR-2332株、Lelystad virus株的核苷酸同源性分别为81.2％、48.6％;编码氨基酸同源性比对结果与核苷酸同源性结果一致,揭示PRRSV GZ-R株属于美洲型毒株;氨基酸缺失位点比对发现,GZ-R NSP2在其第481位、第533-561位存在30个不连续氨基酸的缺失,缺失位点与PRRSV高致病性毒株一致.综上所述,可鉴定PRRSV GZ-R株为美洲型高致病性毒株.试验结果可为进一步探索PRRSV在贵州省的流行趋势以及NSP2在PRRSV复制过程中的作用机制提供一定的参考.