抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备 、纯化及其活性影响因素的研究

为制备抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法,本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡,收集免疫后所产的鸡蛋,分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯,然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果,获得可用于规模化生产的提纯方法;同时研究不同温度、pH条件下抗体活性,寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质.结果显示,本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体.浓度检测结果表明,水稀释法提取的IgY浓度最高,为6.204 mg/mL;PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之,为4.673 mg/mL;水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低,为3.359 mg/mL.间接ELISA检测结果表明,水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高,为1:12800;其次是PEG-6000,为1:6400;而水稀释法最低,为1:1600.综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价,发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法.活性影响因素试验结果表明,提纯的IgY在37～60℃活性稳定;pH为4.0～11.0时具有良好的活性;在酸性条件下,20％ 硫糖铝对Ig Y活性具有较好的保护作用.本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据.