猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达

WANG Miao,NI Tingting,WU Shengjun,ZHAO Yun,SONG Jianchen,DONG Liang,XUE Shujiang

China Animal Husbandry & Veterinary Medicine（2018）

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摘要

为构建猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒,试验根据GenBank中登录的猪附红细胞体ENO基因序列(登录号:CP002525.1)设计特异性引物,对ENO基因进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物克隆到pMD19-T载体中.用KpnⅠ和XhoⅠ对pMD19T-ENO进行双酶切后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体PCR259中,构建PCR259-ENO重组质粒,提取重组质粒进行鉴定.应用脂质体介导转染法将鉴定正确的PCR259-ENO重组穿梭质粒转染293细胞,应用间接免疫荧光法(IFTA)检测ENO基因在293细胞中的表达.结果显示,试验克隆的ENO基因长为1182bp,编码393个氨基酸,与GenBank中ENO基因序列(登录号:CP002525.1)同源性为99％.构建的重组腺病毒穿梭质粒PCR259-ENO经PCR和酶切鉴定正确,并且能在293细胞中表达,表明ENO基因成功插入腺病毒穿梭质粒PCR259中,重组腺病毒穿梭质粒PCR259-ENO构建成功.

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