猫重组变应原Fel d 1 与乙肝病毒核心抗原融合基因的原核表达

为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain 1和chain 2 拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1 loop区,取代HBcAg c/e1 loop 区的D78与E83之间的氨基酸.经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28a-HBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Western blotting和透射电镜检测.结果显示,本试验成功表达了HBcAg-rFel d 1融合蛋白,并利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-rFel d 1融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAg-rFel d 1融合蛋白呈现病毒样颗粒结构.HBcAg-rFel d 1融合蛋白能自发形成病毒样颗粒结构,为猫过敏症的预防与治疗性疫苗的开发奠定基础.