利用单细胞融合技术高效获得融合细胞的方法

试验以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象,用0.25％胰酶将mESC消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对,在含有50％聚乙二醇的ES培养液中培养1 min,随后将细胞继续培养7d,获得既表达红色荧光也表达绿色荧光的克隆即为融合成功.结果显示,单细胞融合法的克隆效率(46.25％)显著高于传统融合的效率(0.001 7％).进一步检测融合细胞的生物学特性发现,虽然细胞形态与mESC具有很大的差异,但依然呈AP阳性,RNA水平上表达Oct4、Sox2和Nanog,具有向三胚层分化的能力等.结果表明,单细胞融合法是一种高效构建融合细胞的新途径.