HB株E.tenella AMA-1基因的克隆及免疫调节型真核表达载体构建

为研究HB株柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)AMA-1基因的免疫原性,根据GenBank收录的AMA-1基因序列设计了1对引物,对HB株E.tenella的AMA-1基因进行克隆,应用生物信息学分析软件预测AMA-1基因的核苷酸及编码的蛋白质的结构和功能.连接pPIC9载体,并与细胞因子IL-2串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-AMA-1,转化毕赤酵母细胞GS115,进行蛋白表达及纯化验证.结果 显示,HB株E.tenella AMA-1基因全长为1 617 bp,编码535个氨基酸,具有跨膜区及信号肽.经酶切和测序鉴定表明,真核表达载体pPIC9-IL-2-AMA-1构建成功.毕赤酵母转化结果表明,成功将重组载体转化到毕赤酵母中,PCR鉴定得到2 200,2 100 bp 2条带.Western blot检测结果表明AMA-1在毕赤酵母中得到了很好的表达.本试验结果为AMA-1基因的功能和核酸疫苗的研制提供依据.