猪细小病毒6型SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立

采用PCR方法扩增PPV6保守区域基因252 bp,将其克隆到pClon007载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒.以质粒模板建立PPV6的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性等验证.结果表明,重组质粒特异性好;建立的real-time PCR方法Ct值与标准品模板在8.80×109～8.80×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.993,斜率为-4.320.该方法检测灵敏度可达8.80×101 copies/μL.该方法对JEV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV等猪常见病原检测均无特异性扩增;对临床样品的检测结果表明,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为40.63％.本试验成功建立了PPV6 SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,可实现对PPV6快速灵敏的诊断.