1型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒液相芯片抗体检测方法的建立

为建立1型鸭甲肝病毒(duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1)和鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)抗体的液相芯片检测方法,应用RT-PCR从鸭尿囊液中扩增获得714 bp的DHAV-1 VP1序列和1 503 bp的DTMUV-E序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅲ和pET-28a(+)并进行表达.通过SDS-PAGE验证DHAV-1-VP1和DTMUV-E蛋白能够有效表达,通过Western blot进一步验证表达的蛋白均可与其对应的阳性血清发生反应.根据xMAP液相芯片技术原理,以表达的重组蛋白为抗原分别与不同编号的微球偶联,获得偶联复合体作为捕获载体,建立DHAV-1和DTMUV抗体单一和双重液相蛋白芯片检测方法.结果表明,DHAV-1和DT-MUV的临界值分别为190.30和223.29,灵敏性检测2种阳性血清的抗体水平分别为1∶51 200和1∶6 400,重复性验证批内和批间变异系数分别为1.44％和3.94％,为DHAV-1和DTMUV抗体监测提供了高通量、重复性好、特异性高的抗体检测体系.