猪流行性腹泻病毒RT-LAMP检测方法的建立与应用

针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因设计LAMP引物,对反应体系的条件优化并进行特异性及敏感性等试验.结果显示:该方法在60℃下恒温扩增60 min,使PEDV的M基因得到了高效率特异性扩增.本试验方法特异性好,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)等无交叉反应,同时也具有较好的灵敏性,最低检测分子拷贝数为1.0×102 copies/μL.反应结束后加入SYBR Green Ⅰ在紫外灯下观察颜色变化,结果显示阳性扩增产物呈现绿色荧光.结果表明:该LAMP检测方法特异性强,灵敏度高,操作便捷,适于临床检测PEDV.