脱氧雪腐镰刀菌烯醇提取、纯化及含量检测

本试验通过提取和纯化方法的优化,旨在获得高纯度的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON).首先将禾谷镰刀菌孢子液接种于玉米培养基,于27℃30％湿度的条件下培养25 d,收集产毒培养基,制成毒素粗提液.经过层析柱2次洗脱,分段收集洗脱液,用薄层色谱法(TLC)确定含DON的洗脱液,合并洗脱液,运用多重结晶法进行纯化,获得DON的纯品,高效液相色谱法(HPLC)进行分析确认.采用该培养方法,每千克玉米培养基可产生DON 56.65 mg,纯化后可得到DON 29.5 mg,纯度达到98.1％;HPLC检测条件为:Waters C18柱(4.6 mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(16:84),流速0.8 mL/min,紫外波长218 nm,色谱柱柱温30℃;本方法加标回收率为86.9％～100.6％,日内相对标准偏差≤9.42％,日间相对标准偏差≤5.79％.本试验建立的DON提取与纯化方法简单,不需要任何特殊的试剂与设备,且该检测方法回收率高,准确度和精密度均能满足试验要求,为DON纯品的定量提供了技术支撑.