比格犬ERβ1293稳定细胞系的建立
Chinese Journal of Veterinary Science（2016）
Abstract
为了建立ERβ1293的稳定表达细胞系,为ERβ1293的功能研究奠定基础.以重组质粒pEGFG-N1-ERβ1 293为模板,扩增出全长ERβ1293,经胶回收纯化后连接到pMD18-T Vector,经测序鉴定后双酶切连接至Lenti-OE-Flag载体,重组质粒经PCR、双酶切、测序鉴定;使用HEK-293T包装细胞系,包装产生慢病毒.将所得病毒悬液感染HEK293细胞,利用Puromycin加以筛选,获得稳定表达细胞系,并采用Western blot方法验证基因表达情况.结果获得了Lenti-OE-Flag-ERβ1293重组质粒,并成功包装成慢病毒.利用病毒感染HEK293细胞后获得了稳定表达细胞系,Westernblot方法证实,稳定表达细胞系可以成功表达ERβ1293蛋白,为研究ERβ1293的功能奠定了基础.
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