羊传染性脓疱病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

根据GenBank已经发表的CEV参考毒株(登录号:AF097215)F1L基因序列,利用Primer Express 3.0软件设计合成1对特异性引物,以pMD19-T-63 bp重组阳性质粒作为标准品,建立了羊传染性脓疱病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法.经过反应条件的优化,建立的羊传染性脓疱病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的线性关系良好,标准曲线的相关系数R2 =0.99,扩增效率E=1.18.该方法敏感性高且特异性强,最低检出下限为65.47拷贝/μL,与羊痘和口蹄疫病毒均不发生交叉反应,重复性好,组内和组间变异系数分别为0.17％～0.59％和0.74％～1.25％.运用该方法对2例羊传染性脓疱病例进行检测,结果均为阳性.因此,可将该方法应用于临床诊断,具有准确、高效、快捷、灵敏的特点.