猪源粪肠球菌Ace蛋白间接ELISA方法的建立与应用
Chinese Journal of Veterinary Science（2014）
摘要
根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(AF260879)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增Ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载体pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法.经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1 mg/L,被检血清稀释度为1∶800,1％ BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15 min,反应的阳性判定值为0.126.交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测.
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