牛病毒性腹泻病毒E0基因重组表达质粒pMG36e-E0的构建与免疫原性分析
Chinese Journal of Veterinary Science（2014）
摘要
利用SacⅠ、HindⅢ限制性内切酶分别对pMG36e与pMD19-T-E0进行双酶切,将目的基因E0整合入穿梭表达载体pMG36e,构建牛病毒性腹泻病毒E0基因重组表达质粒pMG36e-E0.提取重组质粒pMG36e-E0,进行双酶切鉴定及PCR鉴定.将阳性重组质粒pMG36e-E0转化到大肠杆菌DH5α中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定.用表达的E0蛋白二次免疫家兔,间接ELISA法检测其血清抗体水平.结果,重组质粒经双酶切得到大小分别约为3 600、691 bp的2个片段,PCR扩增出691 bp的片段,双酶切与PCR鉴定结果表明目的基因E0正确插入到载体pMG36e中.SDS-PAGE电泳结果表明E0基因在大肠杆菌获得了表达,表达产物相对分子质量大小约为27 000.Western-blotting分析结果证明表达产物能被BVDV阳性血清所识别.ELISA检测结果证明表达的E0融合蛋白能刺激动物产生抗体,具有天然蛋白的免疫原性.
更多关键词
bovine viral diarrhea virus,recombinant protein,prokaryotic expression
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