CTCF因子结合位点突变和缺失质粒的构建及其调控效应分析

本研究采用SOE-PCR技术,分别获得了CTCF因子结合序列的突变和缺失的序列,构建2个重组质粒pEG-FP-N1/1554M和pEGFP N1/1549.质粒pEGFP-N1/1554M由CTCF因子的结合序列CCCTC突变为TAAGT后的序列替换pEGFP-N1的CMV启动子构建而成;质粒pEGFP-N1/1549由CTCF因子结合序列CCCTC缺失后序列(长1 549 bp)替换pEGFP-N1的CMV启动子构建而成.用重组质粒分别转染牛乳腺上皮细胞(BMEC),经筛选获得稳定的单克隆细胞,测定荧光强度并与对照组pEGFP-N1/1554(未缺失)比较荧光强度.结果表明,质粒pEG-FP-N1/1554M的启动子活性显著强于对照组(P＜0.01),质粒pEGFP-N1/1549的启动子活性显著强于对照组(P＜0.01);即CTCF因子结合位点突变和缺失后,bLTF基因启动子活性都显著增强.